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為什么細胞養(yǎng)不好?你知道哪些養(yǎng)細胞的技巧?

更新時間:2021-05-17  |  點擊率:2116

在我們實驗中,養(yǎng)細胞是所有實驗的基礎(chǔ),腫瘤細胞培養(yǎng)過程中,總會遇到這樣那樣的麻煩,以下幾種情況,你是否遇到,如何解決,大師兄給你指明一二三。

如何判斷細胞污染了?

狀態(tài) 1: 細胞培養(yǎng)液變渾濁了,經(jīng)常見到是米湯樣,黃色液體,一般認為細菌污染。

 

狀態(tài) 2:細胞培養(yǎng)基內(nèi)含有能動的小黑點,一般認為是黑膠蟲。

 

狀態(tài) 3:胞培養(yǎng)基清亮,但是能看到飄在培養(yǎng)液帶有毛毛的白色的菌狀物質(zhì),有可能就是真菌感染。

 

策略:細胞污染了就直接扔了,還得把培養(yǎng)箱用酒精棉球擦干凈,并用紫外照射半小時,防止再次污染。同時建議細胞培養(yǎng)時,在培養(yǎng)基中加入青鏈霉素 (尤其是初學者)

細胞培養(yǎng)過程中,細胞周圍包括細胞上有很多小黑點,怎么辦?

 

策略 1:用胰酶消化下來后,低速短時間離心,不同實驗室不一樣,如果平時是 1 000 轉(zhuǎn) 5 min 的話,就可以改為 700 轉(zhuǎn) 3 min,用新的培養(yǎng)瓶培養(yǎng)細胞,細胞收集是少一點,但是一般都能干凈很多。多傳幾代就好多了。

策略 2:如果多次嘗試之后還是不干凈,就懷疑是否存在支原體污染了,用抗支原體藥就 OK 了。一般用上 3~5 天,細胞就干干凈凈了。

細胞培養(yǎng)過程中,發(fā)現(xiàn)貼壁細胞表面沾了很多死細胞,傳代過程中一直存在怎么破?

為什么細胞養(yǎng)不好?你知道哪些養(yǎng)細胞的技巧?

 

有一招屢試不爽,那就是用 PBS 洗兩遍之后,加胰酶進去,晃一晃,迅速將胰酶倒出,再用 PBS 洗一下,再加胰酶正常消化。死細胞由于粘附能力很弱,第一次加胰酶進去以后會掉下來,第二次加胰酶下來的細胞才是活性比較強的細胞。整完一次之后,再次傳代方法同上,一般 2~3 次之后,細胞就完好如初了。

細胞胞質(zhì)疏松,狀態(tài)不好,養(yǎng)不起來,怎么辦?

 

策略 1:一般情況下,從血清下手就行,要么換好血清,要么提高血清濃度,血清濃度提高到 15%~20% 培養(yǎng) 48 h,換成正常 10% 的濃度,用高濃度的血清培養(yǎng)時間過長對細胞有毒性。

策略 2:血清下手之后可以同時采取提高細胞密度的方法,從培養(yǎng)瓶換到六孔板,12 孔板等,細胞密度大,細胞分泌的細胞因子多,腫瘤細胞通過旁分泌途徑促進細胞生長。

預防策略:細胞胞質(zhì)疏松,老化的原因在于細胞傳代次數(shù)比較多,胰酶消化時間太長,這時候,一定要控制細胞傳代次數(shù),注意胰酶消化時間,胰酶消化時間過長,容易導致細胞狀態(tài)不佳以及胞質(zhì)疏松。有一招,元元沒試過,可以嘗試,將細胞凍起來,過段時間復蘇,細胞會長得比較好。

長途運輸過來裝滿培養(yǎng)液的細胞如何處理?

很多人都會遇到從其他地方買來細胞或者快遞運來細胞,裝滿培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶的細胞怎么處理的問題。

第 1 步:先放 37℃ 培養(yǎng)箱放置 4 小時,這樣細胞在通過長途跋涉以后得以穩(wěn)定,觀察細胞狀態(tài)。

第 2 步:將新鮮培養(yǎng)基和舊的培養(yǎng)基 1:1 稀釋,如果細胞狀態(tài)不好,可以將血清濃度提到 15%,否則正常培養(yǎng),這樣有一個過渡期,不至于細胞換血清之后狀態(tài)不佳,15% 的血清培養(yǎng) 48 h 之后換成正常濃度培養(yǎng)。

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