細(xì)胞傳代培養(yǎng)原理

細(xì)胞在培養(yǎng)瓶長成致密單層后，已基本上飽和，為使細(xì)胞能繼續(xù)生長，同時也將細(xì)胞數(shù)量擴(kuò)大，就必須進(jìn)行傳代（再培養(yǎng)）。

傳代培養(yǎng)也是一種將細(xì)胞種保存下去的方法。同時也是利用培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行各種實(shí)驗(yàn)的必經(jīng)過程。懸浮型細(xì)胞直接分瓶就可以，而貼壁細(xì)胞需經(jīng)消化后才能分瓶。

細(xì)胞傳代培養(yǎng)具體操作

1、材料和試劑的準(zhǔn)備

1）細(xì)胞：貼壁細(xì)胞株

2）試劑：0.25％胰酶、1640培養(yǎng)基（含10％小牛血清）

3）儀器和器材：倒置顯微鏡，培養(yǎng)箱、培養(yǎng)瓶、吸管、廢液缸等

2、操作步驟

1）將長滿細(xì)胞的培養(yǎng)瓶中原來的培養(yǎng)液棄去。

2)加入0.5—1ml 0.25％胰酶溶液，使瓶底細(xì)胞都浸入溶液中。

3)瓶口塞好橡皮塞，放在倒置鏡下觀察細(xì)胞。隨著時間的推移，原貼壁的細(xì)胞逐漸趨于圓形，在還未漂起時將胰酶棄去，加入10ml培養(yǎng)液終止消化。

觀察消化也可以用肉眼，當(dāng)見到瓶底發(fā)白并出現(xiàn)細(xì)針孔空隙時終止消化。一般室溫消化時間約為1—3分鐘。

4)用吸管將貼壁的細(xì)胞吹打成懸液，分到另外兩到三瓶中，實(shí)踐培養(yǎng)液塞好橡皮塞，置37℃下繼續(xù)培養(yǎng)。第二天觀察貼壁生長情況。

科研實(shí)驗(yàn)中，細(xì)胞的體外培養(yǎng)一直是一個重要環(huán)節(jié)。細(xì)胞要養(yǎng)好，就要用好血清，如Ausbian®特級胎牛血清，它適合各種細(xì)胞培養(yǎng)，尤其適合難養(yǎng)細(xì)胞，如：干細(xì)胞、肝細(xì)胞，神經(jīng)細(xì)胞，原代培養(yǎng)、細(xì)胞融合、轉(zhuǎn)染細(xì)胞等。

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