細胞培養(yǎng)技術(shù)指的是細胞在體外條件下的生長，在培養(yǎng)的過程中細胞不再形成組織（動物）。

培養(yǎng)物是單個細胞或細胞群。細胞在培養(yǎng)時都要生活在人工環(huán)境中，由于環(huán)境的改變，細胞的移動或受一些其他因素的影響，培養(yǎng)時間加長，傳代導致細胞出現(xiàn)單一化型。

優(yōu)點

1.直接觀察活細胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)和生命活動。用于細胞學、遺傳學、免疫學、實驗醫(yī)學和腫瘤學等多種學科研究.

2.直接觀察細胞的變化可便于攝影。

3.研究細胞種類如低等到高等到人類、胚胎到成體、正常組織到腫瘤。

4.便于使用各種技術(shù)：相差、熒光、電鏡、組化、同位素標記等方法觀察和研究細胞狀況。

5.是分子生物學和基因工程學的研究對象，也是其主要的組成部分。

6.易于施用物理、化學生物的實驗研究。

7.易于提供大量生物性狀相似的實驗對象,耗資少比較經(jīng)濟。

8.成為生物制品單克隆抗體生產(chǎn)和基因工程等的材料來源。

缺點

組織和細胞離體后獨立生存在人工的培養(yǎng)環(huán)境中，雖然模擬體內(nèi)環(huán)境，仍有很大差異。 因而利用培養(yǎng)細胞做實驗時，不應視為體內(nèi)細胞*相同，把實驗結(jié)果推測體內(nèi)，輕易做出與體內(nèi)等同的結(jié)論。

具體步驟

1.細胞復蘇

將凍存細胞從液氮中取出后，在37℃水浴鍋內(nèi)不斷搖動促進其融化。將融化的細胞移入離心管中，加入37oC預熱的DMEM*培養(yǎng)基中（其中胎牛血清約為10%），輕輕吹勻，離心，500g離心2min，棄上清液。

加入DMEM*培養(yǎng)基清洗，棄上清液。加入DMEM*培養(yǎng)基，輕輕吹打混勻，制成細胞懸液，接種于培養(yǎng)皿/瓶中，在含5% CO2的細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

2.細胞傳代

當細胞密度達到80%~90%（過早產(chǎn)量不足，過晚細胞狀態(tài)不佳，1:2至1:10以上的比率傳代培養(yǎng)，一般1:3至1:5細胞一代，即從細胞接種到分離再培養(yǎng)的一段時間，非細胞有絲分裂次數(shù)）時，去掉*培養(yǎng)基，用1X PBS清洗2次。

加入胰蛋白酶（注意：消化液的量以蓋住細胞最好，最佳消化溫度是37oC。顯微鏡下觀察細胞：倒置顯微鏡下觀察消化細胞，若胞質(zhì)回縮，細胞之間不再連接成片，表明此時細胞消化適度）進行消化，放入細胞培養(yǎng)箱中約2-3min。

加入適量DMEM*培養(yǎng)基終止胰蛋白酶消化，轉(zhuǎn)移至離心管后500g離心2min，棄上清液，再加入DMEM*培養(yǎng)基清洗，棄上清液。

加入DMEM*培養(yǎng)基，輕輕吹打混勻，吸取10微升進行計數(shù)，然后按照所需細胞量在含5% CO2的細胞培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)。

3.細胞凍存

當細胞密度達到80%~90%時，去掉*培養(yǎng)基，用1X PBS清洗2次。加入胰蛋白酶進行消化，放入細胞培養(yǎng)箱中約2-3min。加入DMEM*培養(yǎng)基終止胰蛋白酶消化，轉(zhuǎn)移至離心管后500g離心2min，棄上清液，再加入DMEM*培養(yǎng)基清洗，棄上清液。加入lml凍存液（90%胎牛血清，10% DMSO。 一般來講血清含量可以在10%-90%之間調(diào)整，凍存液中加入血清一方面可以為細胞提供營養(yǎng)，另一方面可以在細胞凍存過程中提供非滲透性保護物質(zhì)，如蔗糖，白蛋白等從而更好地保護細胞），放入凍存管內(nèi)（管內(nèi)有異丙醇，以保證溫度降低的速度），立即放入4oC冰箱中凍存30min，然后放入-20oC冰箱中凍存30min，再置于-80℃冰箱內(nèi)過夜。

第二天放入液氮中，可以保存至少兩年，如不放人液氮，可以保存三個月。

細胞凍存和復蘇的原則是：慢凍速融，這樣更加有利于保持細胞的活力。凍存細胞不加任何保護劑，會導致細胞內(nèi)冰晶的產(chǎn)生，從而使細胞產(chǎn)生內(nèi)源性的機械損傷，引起細胞內(nèi)環(huán)境滲透壓，PH，電解質(zhì)等的改變，進而促使細胞死亡。

科研實驗中，細胞的體外培養(yǎng)一直是一個重要環(huán)節(jié)。細胞要養(yǎng)好，就要用好血清，如Ausbian®特級胎牛血清，它適合各種細胞培養(yǎng)，尤其適合難養(yǎng)細胞，如：干細胞、肝細胞，神經(jīng)細胞，原代培養(yǎng)、細胞融合、轉(zhuǎn)染細胞等。