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支原體檢測,測的是什么?上清 or 細胞?

更新時間:2023-08-25  |  點擊率:496

在細胞治療、疫苗生產等領域,藥物在上市前,需要通過支原體檢測,證明生產過程中沒有支原體的污染。一般情況下,支原體附著在細胞表面,因此,在檢測前,收集細胞后,保留上清,用于后續(xù)檢測實驗。

 

德國MB公司生產的Venor®GeM qEP試劑盒設計用于定量檢測細胞培養(yǎng)物和其他生物基質中的支原體, 該試劑盒是基于實時或定量PCR (qPCR),作為快速,穩(wěn)健和敏感支原體的,可替代《藥典》種傳統方法的檢測手段。

 

該檢測針對支原體基因組中的一個高度保守區(qū)域,以檢測歐洲藥典第2.6.7(EP 2.6.7)、日本藥典第G3(JP G3)和更多物種(檢測特征"一節(jié)中的列表)中包含的所有物種。

 

該產品已通過廣泛的qPCR設備成功測試。試劑盒設計滿足EP 2.6.7JP G3對不同樣品材料(軟骨細胞、血清、細胞培養(yǎng)上清等)提取樣品DNA后的檢測標準。

 

實驗開始時,需要先收集細胞培養(yǎng)上清,如果細胞含量較低,可對培養(yǎng)物進行富集。用支原體提取試劑盒,對其中的DNA進行提取。

 

整個測試需要不到3小時,并且與基于發(fā)光的酶測定、熒光染色或培養(yǎng)方法相比,不需要活的支原體細胞。值得注意的是,與幾種生化和細胞方法相比,PCR檢測被認為在靈敏度和精度方面*。該試劑盒包含所有必要的PCR成分,包括熱啟動Taq聚合酶,引物和dNTPs在凍干混合物(支原體混合物)以及補液緩沖液和PCR級水。

 

德國MB還可提供10CFU/100CFU的配套標準品,以及各類支原體基因組DNA,幫助相關項目完成藥典的方法學驗證。


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