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細(xì)胞培養(yǎng)之:如何從血清檢測指標(biāo)評價優(yōu)質(zhì)血清

更新時間:2022-07-08  |  點(diǎn)擊率:788

牛血清是目前細(xì)胞培養(yǎng)中用量最大的天然培養(yǎng)基,含有豐富的、細(xì)胞生長必需的營養(yǎng)成分,具有極為重要的功能。

要保證血清質(zhì)量,需要有嚴(yán)格的質(zhì)控,包括從外觀到理化性質(zhì)、細(xì)胞增殖試驗(yàn)和微生物檢查,制定一系列的標(biāo)準(zhǔn),以及出廠產(chǎn)品能符合這些標(biāo)準(zhǔn)。

一、外觀及相關(guān)物質(zhì)含量

 


以胎牛血清為例,優(yōu)質(zhì)的特級胎牛血清,外觀應(yīng)是淡棕色至橙色透明液體,無顆粒物沉淀。

PH在6.7-8.2之間;

滲透壓在260-340mosm/kg之間;

血紅蛋白含量小于20mg/dL;

總蛋白含量在30-50g/L;

白蛋白含量在14-34g/L;

α、β、γ球蛋白含量則以實(shí)際測量為準(zhǔn);

IgG應(yīng)小于250μg/mL;

內(nèi)毒素含量應(yīng)小于3EU/mL;

內(nèi)毒素直接參與細(xì)胞凋亡,血清中內(nèi)毒素含量越低,對細(xì)胞毒性越小,越利于細(xì)胞的生長和傳代


二、無菌檢測

 

優(yōu)質(zhì)的特級胎牛血清還要經(jīng)過嚴(yán)格的無菌檢測。確保血清無污染。

檢測項目包括厭氧菌、好氧菌、真菌(最容易污染細(xì)胞的酵母菌和霉菌都應(yīng)包括在內(nèi))以及支原體檢測。檢測結(jié)果應(yīng)全部為陰性,視為通過無菌檢測。



三、病毒檢測

 

血清含有bing毒,會導(dǎo)致宿主細(xì)胞發(fā)生腫脹、壞死、脫壁,不僅嚴(yán)重影響實(shí)驗(yàn)進(jìn)度,更可能會對實(shí)驗(yàn)人員造成威脅。

對于血清中的病毒檢測,重點(diǎn)放在那些曾世界大范圍爆發(fā)、人畜共患或是十分常見的病毒身上。

每個地區(qū)的法規(guī)會有些許區(qū)別,但牛副流感3型病毒(PI-3)、牛腹瀉病毒(BVD)、牛細(xì)小病毒等是任何國家和地區(qū)的檢測報告中,都應(yīng)標(biāo)注清楚的。

一批合格的血清,所有bing毒檢測項目均應(yīng)為陰性。



四、細(xì)胞生長情況

 

促進(jìn)細(xì)胞增殖方面,也是血清一項不可忽視的指標(biāo)。每一批次血清也應(yīng)就克隆率、細(xì)胞毒性、細(xì)胞增殖密度、和倍增時間進(jìn)行檢查。

所有檢測結(jié)果應(yīng)符合相應(yīng)的規(guī)范。



五、抗體檢測

 

病毒檢測反映的是動物采血時、或血清加工過程中有沒有感染病毒,而抗體檢測則表示該供體動物在采血前一段時間內(nèi),是否感染過病毒。

優(yōu)質(zhì)的特級胎牛血清,應(yīng)保證動物從始至終都沒有感染過相關(guān)病毒,因此檢測結(jié)果應(yīng)為陰性。

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