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為您介紹透析胎牛血清的相關應用

更新時間:2022-07-08  |  點擊率:625

透析胎牛血清主要用于可能需要關注小分子濃度的特殊研究。這主要包括四個領域,其中有些領域是相互交叉的

透析胎牛血清應用廣泛,以下僅稍作舉例。


 


蛋白質組學

同位素標記

細胞通訊

報告基因細胞系的篩選

1、 細胞培養(yǎng)條件下穩(wěn)定同位素標記技術。

這是一項以質譜為基礎的定量蛋白質組學技術,它將13C或15N標記的氨基酸摻入到培養(yǎng)基中培養(yǎng)細胞,來標記細胞內新合成的蛋白質,一般培養(yǎng)5-6代,細胞中的蛋白質將都被同位素標記。然后質譜分析,即可比較經過不同處理的細胞,其內部蛋白質豐度的變化。它還可用于正常細胞與病理狀態(tài)細胞二者的比較。為避免胎牛血清中天然氨基酸的干擾,這時就需要用到透析胎牛血清,以保證摻入細胞蛋白中的氨基酸均為標記氨基酸(常采用賴氨酸或精氨酸)。

2、工程細胞株的篩選。

以常見的工程細胞株CHO-DFGRˉ為例,該細胞自身缺乏二氫葉酸還原酶,必須在添加了次黃嘌ling、胸腺嘧啶和甘氨酸的培養(yǎng)液中才能得以存活。如將含有目的基因與DHFR基因的質粒轉染細胞,則可以得到在不含上述添加劑的培養(yǎng)基上也能生長的細胞克隆。通過甲氨蝶呤進一步篩選,可進一步得到能表達大量目的蛋白的細胞克隆。這時的胎牛血清由于不含有次黃嘌ling和胸腺嘧啶等,也常作為選擇培養(yǎng)基的一部分,參與陽性轉染細胞克隆的篩選。

3、研究某些因子如核苷酸或微量元素如硒、鋅對某種類型細胞增殖、分化的影響。

這時也需要用透析胎牛血清,以避免培養(yǎng)體系中天然存在的這些物質的干擾。

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